特异性糖苷水解酶

　　特异性糖苷水解酶ENDO-CC内切酶，ENGase广泛应用于需要糖肽、糖蛋白和糖复合物的均质糖苷的合成应用中。信息发布网性单克隆抗体的聚糖重构尤其重要，因为聚糖结构影响抗体效应器功能、稳定性和药代动力学/药效学。

　　为了控制Fc-N-聚糖，我们进行了Fc-N-聚糖从异构N-糖基化模式重排为用化学酶法与两种类型的内-β-乙酰基合成同质N-聚糖氨基葡糖苷酶(ENG’ases)，一种作为水解酶切割所有异构体的酶N-聚糖，另一种用作糖苷合成酶以产生均匀的N-聚糖。

　　作为起始材料，我们使用了转基因家蚕中产生的抗Her2抗体

　　茧，由非岩藻糖基少甘露糖型(Man2-3GlcNAc2)、高甘露糖组成

　　型(Man4-9GlcNAc2)和复合型(Man3GlcNAc3-4)N-聚糖。因此

　　几种ENG’ase(endoS、endoM、endoD、endoH和endoLL)的裂解

　　抗体上的聚糖通过endoS、endoD和endoLL的组合。接下来，所需的N-聚糖(M3；Man3-

　　GlcNAc1、G0；GlcNAc2Man3GlcNAc1、G2；Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc1，A2；NeuAc2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc1)

　　从相应的恶唑啉转移到具有ENG’ase突变体(endo-S-D233Q)的完整抗Her2抗体上的GlcNAc残基，并且

　　获得了糖工程化的抗Her2抗体。抗Her2抗体的结合测定具有FcγRIIIa-V158的同质N-聚糖表明γRIIIa-V158的亲和力。此外，糖工程抗Her2的ADCC测定使用SKBR-3和BT474进行抗体(mAb-M3、mAb-G0、mAb-G2和mAb-A2)并揭示了糖型影响ADCC活性。

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